3 血液半乳糖的医学检查
3.1 检查名称
3.2 分类
3.3 血液半乳糖的测定原理
半乳糖氧化酶催化半乳糖被空气中的氧氧化生成的半乳已二醛糖和过氧化化氢,后者被过氧化物酶催化放出氧,使色原性氧受体被氧化呈色。
3.4 试剂
(1)磷酸盐缓冲液(0.02mol/L pH7.4):溶解磷酸二氢钾1.06g和磷酸氢二钠1.74g于950ml蒸馏水中,调节pH7.0,然后稀释到1000ml。
(2)半乳糖氧化酶:称取约1mg(相当30u)的半乳糖氧化酶干粉,置于乳钵中,加缓冲液研磨助溶,最后加缓冲液至50ml,过滤,此液可在冰箱保存数天。
(3)显色剂:溶解10mg过氧化化氢酶干粉于500ml缓冲液中,加入10g/L邻联茴香胺甲醇溶液5ml,置冰箱保存。如溶液颜色变深,空白吸光度增高,则应弃去,重新配制。
(4)硫酸溶液30%(V/V):小心加浓硫酸300ml于700ml蒸馏水中。
(5)氢氧化钡溶液(0.15mol/L):溶解47g氢氧化钡(Ba(OH)2·8H2O)于新蒸馏水或煮沸的去离子水中,然后稀释至1000ml,如溶液出现混浊,则将瓶口塞紧,在室温中放置数日,取上清液应用。氢氧化钡能吸收空气中的二氧化化碳生成碳酸钡沉淀。
(6)硫酸锌溶液(0.175mol/L):称取新结晶的硫酸锌(Zn SO4·7H2O)50g,以蒸馏水溶解并加至1000ml。
(7)半乳糖标准贮存液(10g/L):溶解D(+)半乳糖1g于蒸馏水中,稀释至100ml。
(8)半乳糖标准应用液:取贮存液1ml,2ml,分别以蒸馏水稀释到100ml,其浓度分别为0.55mmol/L,1.1mmol/L的半乳糖标准应用液。
3.5 操作方法
(1)取蒸馏水0.5ml,血清0.1ml,0.15mol/L氢氧化钡0.2ml,混匀,加0.175mol/L硫酸锌0.2ml,混匀离心沉淀,制成1/10的去蛋白血滤液。
(2)按表1所列顺序进行操作。
混匀,用分光光度计530nm以空白管调零,读取各管吸光度
3.6 正常值
成人 0mmol/L;
儿童 1.1mmol/L。
3.7 化验结果临床意义
正常成人血及尿中不含或仅有微量半乳糖,哺乳期妇女及新生儿血及尿中有时可有少量半乳糖,先天性半乳糖代谢障碍的患者血液及尿中可出现半乳糖。甲状腺机能亢进时指数增高,肝炎病患者半乳糖指数升高,疾病缓解后指数下降。
3.8 附注
(1)尿中半乳糖参考值:新生儿<3.33mmol/L;婴儿至成人(24h)<0.08mmol。
(2)血清半乳糖升高也可见于饭后、情绪紧张、使用激素治疗等。