3 概述
山梨醇脱氢酶(Sorbitol dehydrogenase,SDH)又称艾杜醇脱氢酶(Iditol dehydro-genase,ID),能可逆地催化D-山梨醇氧化为D-果糖。人体内此酶主要分布于肝脏,肾、脑、心、脾等组织中含量极少,血清中此酶活力很低,如酶活力升高,强烈提示肝损害。检测血清SDH在反映肝损伤方面较ALT可能更具特异性。
5 血清山梨醇脱氢酶医学检查
5.1 分类
5.2 取材
5.3 血清山梨醇脱氢酶的测定原理
在pH 10的甘氨酸/氢氧化钠缓冲体系中,SDH催化下列反应:
通过监测340nm处NADH产生的速率,计算出SDH活性。
5.4 试剂
试剂A:100mmol/L NAD+溶液:4℃避光保存可稳定1周。
试剂B:用0.1mol/L甘氨酸/氢氧化钠缓冲液(pH 10)配制成20mmol/L D-山梨醇基质液,其中含氯化锌2.0mmol/L。
5.5 操作方法
试剂A 5μl与血清50μl混合,置37℃水浴5min,再加入1ml预温至37℃的试剂B,迅速混匀并转入37℃恒温比色杯(10mm光径)中,在340nm处监测。延迟时间60s后,每隔30s读取1次吸光度,连续读3min,求出平均每分钟吸光度变化值(△A/min)。在上述条件下,每分钟催化产生1μmol NADH的酶量,定义为1个酶活性单位。
附注:
(1)本法线性范围为0~180U/L。批内和批间CV分别为3.9%和5.2%。
(2)反应试剂中加入2mmol/L锌离子可使酶活性提高10%。
(3)甘氨酸缓冲液浓度为0.1mol/L,pH为9.5~10.0时SDH活力最高。
5.6 正常值
健康成人(n=60)血清:0~3.1U/L。
5.7 化验结果临床意义
(1)正常人血清中SDH大多数测不出。
(2)急性肝炎时血清SDH活性明显增高,据孙玉蓉等报道,在急性肝炎时,血清SDH阳性率为92.1%,这与Asada报告的阳性率(87%)基本相似。一般认为,SDH常在急性肝炎的黄疸前期或肝炎早期升高,发病1周后达到峰值,升高幅度大致与转氨酶相平衡,恢复到正常范围的时间较转氨酶(ALT,AST)为早。因此,它对肝炎的早期诊断有很大的价值。
有作者报道急性肝炎血清中SDH活性最高可达15.5U/L(比色法),是参考值上限的6.2倍;而孙玉蓉等用动力学法可达93U/L,是此参考值上限的18.6倍,造成这一差别的原因可能是由于反应原理不同,前者反应方向是由山梨醇到果糖,反应pH是9.8;而后者采用的反应方向是由果糖到山梨醇,反应pH是7.4。
(3)在阻塞性黄疸及其他疾病,一般不升高,即使偶尔升高,也是因为并发肝实质损伤之故。因此它能较早期、敏感、特异地反映肝损伤情况,特别对肝细胞黄疸和阻塞性黄疸此酶活力可增高。
(4)慢性肝炎及肝硬化静止期此酶活力在正常范围,活动期则稍增加。癌肿转移时,此酶活力可增高。
(5)内毒素休克导致低氧血症和肝脏缺血时,肝脏中央小叶细胞严重受损,此酶活性显著升高。
5.8 附注
(1)本法线性范围为0~180U/L。批内和批间CV分别为3.9%和5.2%。
(2)反应试剂中加入2mmol/L锌离子可使酶活性提高10%。
(3)甘氨酸缓冲液浓度为0.1mol/L,pH为9.5~10.0时SDH活力最高。