1 拼音
tán yè fēn mì xíng IgA
4 痰液分泌型IgA的医学检查
4.1 检查名称
4.2 分类
4.3 取材
痰液
4.4 痰液分泌型IgA的测定原理
激光散射光系指一定波长的光通过溶液时遇到抗原-抗体复合物,光线被折射,发生偏转。偏转角度可以从0~90°,这种偏转的角度可因光线波长和离子大小不同而有所区别。散射光的强度与抗原抗体复合物的量成正比,同时也和散射夹角成正比,和波长呈反比。测定方法有终点法和速率法两种。
(1)终点散射比浊法:终点法是在抗原-抗体反应达到平衡时,即复合物形成后作用一定时间,通常为30~60min,复合物浊度不再受时间的影响,但又必须在聚合产生絮状沉淀之前进行浊度测定。
(2)速率散射比浊法:速率比浊是一种先进的动力学测定法,在1977年由Sternbery首先用于免疫测定。所谓速率是指抗原抗体结合反应过程中,在单位时间内两者结合的速度。速率法是测最大反应速度,即反应达顶峰时的峰值,见表1。
由上数据可看出,抗原抗体结合反应在几十秒内得出结果,峰值的高低与抗原的量成正比,峰值出现的时间和抗体的浓度、抗原抗体的亲和力直接相关。
4.5 试剂
(1)稀释液:0.2mol/L Na2HPO463ml,0.2mol/L NaH2PO437ml,0.5mol/L NaCl 100ml,NaN21.0g,蒸馏水加至1000ml,经0.45μm微孔滤膜过滤,分装,4℃保存备用。
(2)反应液:聚乙二醇(PEG,分子量6000)4.6g溶于稀释液中,略微加热助溶,补足100ml,用0.45μm微孔滤膜过滤分装。4℃保存备用。
(3)校正血清:自制校正血清时,可根据ICS校正卡上所列各种蛋白成分的含量,应用国产标准参考血清,根据公式C1V1=C2V2换算成校正卡上含量。亦可将无溶血、无乳糜的正常人混合血清测出有关成份的含量后,略作调正,使与校正卡上含量一致,然后过滤分装,低温保存。
(4)质控痰液:可将数十份正常人痰液混合,加1g/L NaN3,直接用C或D稀释度即可。
(5)抗血清:可用国内特异性好,亲和力强,效价高的抗血清,选择最适稀释度,用0.45μm微孔滤膜过滤。以已知含量参考血清作为标准抗原,用ICS手动或自动方式测出该成分的含量,使与校正卡上所列含量一致,然后分装4℃保存。
4.6 操作方法
使用免疫散射比浊操作法。
4.7 正常值
2.03±0.21mg/L。
4.8 化验结果临床意义
SIgA减少时,黏膜抵抗力下降,易患呼吸道感染;经有效治疗后,免疫功能改善,痰中SIgA可回升。对急性支气管炎、慢性气管炎急性发作、肺炎等有一定的辅助诊断意义。
4.9 附注
(1)抗原抗体的比例对浊度的影响:当抗原抗体比例相等时,形成的复合物和解离是相等的。当抗原含量过多时,形成的复合物小,而且倾向于再溶解,可逆反应大。当抗体含量过多时,形成的复合物体积大,且为不溶性,可逆反应小。因此,作为速率比浊,令其抗体过剩,有利于复合物的形成。
(2)抗血清的质量影响:作为免疫反应的抗血清要求效价高、特异性强、纯度高。作为比浊用的抗血清还应具备:
①抗血清的亲和力要大,故动物免疫时可采取小量,长期免疫的方法获得。
②动物的种类,以R型动物(包括羊、豚鼠、家兔等)制备的抗血清亲和力强,抗原抗体结合后不易解离。
③抗血清须严格处理,应无干扰离子,可采用高速离心或0.45μm超滤膜过滤以排除干扰。长期保存须放-20℃保存。
①抗原抗体反应最适pH为6.5~8.5,超过此限度则不易形成复合物,甚至可被分解。
②离子强度可直接影响抗原抗体反应的结合,离子强度大复合物形成快,低则阻碍复合物的形成,应用PBS是较好的反应液。
(4)亲水剂的影响:亲水剂如PEG(聚乙二醇),Tween20,MES(玛啡代-2烷磺酸)等可促进沉淀反应的形成。缓冲液中引入一定的PEG对大分子复合物沉淀是十分重要的。
(5)标准曲线的应用:当试剂条件和室温条件不变时,曲线可相对用一段时间,但不能长期不变。应用质控血清校准,可保证测定值的准确、可靠。