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2010年版药典三部附录Ⅷ
另取与凝胶同样大小的厚滤纸6张、硝酸纤维素膜1张,用EBM缓冲液浸透。注意事项:(1)电泳时应有冷却系统,否则琼脂糖凝胶会出现干裂。5ml,照紫外-可见分光光度法(附录ⅡA),在波长260nm处测定各管洗脱液的吸光度,以吸光度为纵坐标,洗脱液体积(ml)为横坐标分别作图,波长260nm处的峰顶洗脱液体积为空流体积VO。
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免疫印迹法
第一阶段为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)。将在凝胶中已经分离的条带转移至硝酸纤维素膜上,选用低电压(100V)和大电流(1~将印有蛋白质条带的硝酸纤维素膜(相当于包被了抗原的固相载体)依次与特异性抗体和酶标第二抗体作用后,加入能形成不溶性显色物的酶反应底物,使区带染色。图15-12免疫印迹法原理示意图
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酶联免疫电转移印斑法
第一阶段为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)。将在凝胶中已经分离的条带转移至硝酸纤维素膜上,选用低电压(100V)和大电流(1~将印有蛋白质条带的硝酸纤维素膜(相当于包被了抗原的固相载体)依次与特异性抗体和酶标第二抗体作用后,加入能形成不溶性显色物的酶反应底物,使区带染色。图15-12免疫印迹法原理示意图
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WS/T 562—2017 克-雅病诊断
200mA稳流70min(湿式)或60mA60min(半干式)电转移到硝酸纤维素膜。o)加第二抗体(用1:100正常羊血清/PBS稀释)孵育30min,辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗兔抗体1:200稀释,用于多克隆抗体检测;扁桃体活检组织提取物经蛋白酶K水解后仍在17KD~b)血液样品储存应为-70℃,在此条件下DNA样品可长期保存。
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金免疫技术
3.光吸收性胶体金在可见光范围内有一单一光吸收峰,这个光吸收峰的波长(λmax)在510~斑点免疫层析试验:(一)原理:斑点免疫层析试验(dotimmunochromatographicassay,DICA)简称免疫层析试验(ICA),也以硝酸纤维素膜为载体,但利用了微孔膜的毛细血管作用,滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端渗移,犹如层析一般。
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斑点-ELISA
斑点-ELISA(dot-ELISA)的特点是:①以吸附蛋白质能力很强的硝酸纤维素膜为固相载体;在实验室中斑点-ELISA可按下法进行。在硝酸纤维膜上用铅笔划成4mm×4mm的小格,在每格中央点加抗原1~②将试剂膜封在小盒内,膜下垫吸水剂,洗涤液通过膜吸入盒内。③将试剂膜固定在小杠框格中放入特殊的自动分析仪中检测。