-
转染
转染(transfection)指以病毒的核酸(DNA或RNA)或质粒DNA使细胞感染称为转染。例如用φX174噬菌体的DNA来使大肠杆菌的原生质球或经钙处理的细胞感染,大肠杆菌就会产生出具有感染能力的噬菌体颗粒。噬菌体DNA直接导入受体细胞,进入感受态细菌的噬菌体DNA可以同样复制和繁殖,这种方式称为转染。
-
基因转染
化学转染法1.DEAE-葡聚糖法DEAE葡聚是最早应用哺乳动物细胞转染试剂之一,DEAE-葡聚糖是阳离子多聚物,它与带负电的核酸结合后接近细胞膜而被摄取,用DEAE-葡聚糖转染成功地用用于瞬时表达的研究,但用于稳定转染却不是十分可靠。电穿孔靠脉冲电流在细胞膜上打孔而将核酸导入细胞内。
-
siRNA
概述SmallinterferingRNA(siRNA):是一种小RNA分子(~21-25核苷酸),由Dicer(RNAaseⅢ家族中对双链RNA具有特异性的酶)加工而成。siRNA识别靶序列是有高度特异性的,因为降解首先在相对于siRNA来说的中央位置发生,所以这些中央的碱基位点就显得极为重要,一旦发生错配就会严重抑制RNAi的效应。4.是RISC组分。
-
miRNA
概述microRNAs(miRNAs)是一种小的,类似于siRNA的分子,由高等真核生物基因组编码,miRNA通过和靶基因mRNA碱基配对引导沉默复合体(RISC)降解mRNA或阻碍其翻译。如果miRNA与靶位点完全互补(或者几乎完全互补),那么这些miRNA的结合往往引起靶mRNA的降解(在植物中比较常见)。miRNA的上调可用于鉴定功能获得表型;
-
microRNAs
概述microRNAs(miRNAs)是一种小的,类似于siRNA的分子,由高等真核生物基因组编码,miRNA通过和靶基因mRNA碱基配对引导沉默复合体(RISC)降解mRNA或阻碍其翻译。如果miRNA与靶位点完全互补(或者几乎完全互补),那么这些miRNA的结合往往引起靶mRNA的降解(在植物中比较常见)。miRNA的上调可用于鉴定功能获得表型;
-
神经干细胞
神经干细胞是一种终身具有自我更新能力的细胞,其子细胞能分化产生神经系统的各类细胞,干细胞经过不对称分裂产生一个祖细胞和另一个干细胞,祖细胞具有有限的自我更新能力,并自发分化产生成神经元细胞和成胶质细胞等,从而生成神经元及神经胶质细胞。作为一种信号传导途径,Notch信号传导系统尚未完全阐明。
-
报告基因
常用的有氯霉素乙酰转移酶基因(cat)、β-半乳糖苷酶基因、二氢叶酸还原酶基因、荧光酶基因等。近年来从上述杂交体系中发展出的单一杂交体系技术,也是根据报告基因表达量的检测筛选出与已知顺式作用元件相结合的未知因子的DNA,该项技术正广泛应用于克隆细胞中含量微弱且用生化手段难以纯化的反式作用因子。
-
反向遗传学
能够拯救病毒的遗传材料称为感染性克隆,一般是在细菌质粒中含有整个病毒基因组的cDNA拷贝,使得cDNA本身或从cDNA体外转录所得的RNA具有感染性。RNA病毒的反向遗传系统通过定向修饰病毒的基因组序列,检测被拯救的人工改造病毒的表型,可以在体内(invivo)有效地研究病毒基因结构、功能和病毒-宿主相互作用。
-
基因探针
基因探针(probe)就是一段与目的基因或DNA互补的特异核苷酸序列,它可以包括整个基因,也可以仅仅是/基因的一部分;有了mRNA作模板后,在逆转录酶的作用下,就可以合成与之互补的DNA(即cDNA),cDNA与待测基因的编码区有完全相同的碱基顺序,但内含子已在加工过程中切除。
-
重组DNA制品
重组DNA制品(RecombinantDNAProducts.rDNAProducts)系采用遗传修饰,将所需制品的编码DNA通过一种质粒或病毒载体,引入适宜的微生物或细胞系,DNA经过表达和翻译后成为蛋白质,再经提取和纯化而回收所需制品制得。转染载体前的细胞或微生物称为宿主细胞,用于生产过程中两者的稳定结合称为宿主-载体系统。
-
质粒
质粒是环状双链DNA分子,同线状DNA分子相比,围绕双螺旋主轴连续排列的核苷酸的旋转角度稍有变动,就更容易使DNA分子的构象发生改变,即出现超螺旋的(supercoiled)构象。质粒载体的大小同宿主细胞生长延缓的程度呈正相关,这可能是由于质粒载体相对分子质量大,则对宿主细胞DNA复制的负荷更大的缘故。
-
反转录病毒载体
反转录病毒载体可以容纳外源DNA的长度在10kb左右,以很高的转染率感染宿主细胞,特别是分裂中的细胞。转入宿主的细胞后,反转录病毒载体随即整合到宿主细胞基因组内,这种整合的位点是随机的。其目的是在于提高载体的安全性,防止反转录病毒进入宿主细胞后进行增殖并包装成病毒颗粒对宿主细胞造成可能的伤害。
-
DNA致瘤病毒
DNA致瘤病毒:DNA病毒中有50多种可引起动物肿瘤。(3)乙型肝炎病毒(hepatitisbvirus,HBV):流行病学调查发现,慢性HBV感染与肝细胞性肝癌的发生有密切的关系。HBV的致癌作用看来是多因素的:①如在前文所述,HBV导致的慢性肝损伤使肝细胞不断再生,这使另外的致癌因素(如黄曲霉毒素B1)的致突变作用容易发生;
-
再生医学
概念:再生医学是通过研究机体的正常组织特征与功能、创伤修复与再生机制及干细胞分化机理,寻找有效的生物治疗方法,促进机体自我修复与再生,或构建新的组织与器官,以改善或恢复损伤组织和器官的功能的科学。同时还发现了3个来源于大鼠、5个来源于人的真皮干细胞克隆、体外长期连续培养过程中全部发生恶性转化。
-
免疫共沉淀
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。免疫共沉淀实验流程(1)转染后24-48h可收获细胞,加入适量细胞裂解缓冲液(含蛋白酶抑制剂),冰上裂解30min,细胞裂解液于4°C,最大转速离心30min后取上清;
-
普拉替尼
药品名称:普拉替尼Pralsetinib分类:呼吸系统肿瘤用药是否需要检测靶点:是制剂与规格:胶囊:100mg适应证:既往接受过含铂化疗的转染重排(RET)基因融合阳性的局部晚期或转移性NSCLC成人患者的治疗。