1 概述
单胺氧化酶为催化单胺氧化脱氨反应的酶。缩写MAO,也有称为含黄素胺氧化酶的。 EC1.4.3.4。作用于一级胺及其甲基化的二、三级胺,也作用于长链的二胺。对所谓生物胺,即酪胺、儿茶酚胺、5-羟色胺、去甲肾上腺素、肾上腺素等也有作用。
RCH2NH2+02H20→RCHO+NH3+H2O2
多见于脊椎动物的各种器官,特别是分泌腺、脑、肝脏,但在无脊椎动物、豆类的芽等植物中也存在。在细胞内存在于线粒体外膜上,是不溶性酶。含FAD。1-异烟酰-2-异丙基肼(iproniazid)、β-苯基异丙基肼(pheniprazine)等药物对此酶有强烈的竞争性的阻抑作用,称为MAO抑制剂,但如果给动物,则可提高脑中去甲肾上腺素和5-羟色胺等单胺的浓度,造成行动的刺激。所以认为单胺氧化酶具有调节生物体内胺浓度的功能。单胺氧化化酶(MAO)为反映肝纤维化的酶,MAO大致可分为两类:一类存在于肝、肾等组织的线粒体中,以FAD为辅酶,对伯、仲、叔胺均能氧化,参与儿茶酚胺的分解代谢。另一类存在于结缔组织,是一种细胞外酶,无FAD而含有磷酸吡哆醛,只对伯胺起作用,受山黧豆素及β-氨基丙晴的抑制,催化胶原分子中赖氨酰或羟赖氨酰残基的末端氧化成醛基。血清中MAO和结缔组织中的MAO性质相似,能促进结缔组织的成熟,在胶原形成过程中,参与胶原成熟的最后阶段架桥形成,使胶原和弹性硬蛋白结合。
3 单胺氧化酶的医学检查
3.1 检查名称
3.2 分类
3.3 单胺氧化酶的测定原理
单胺氧化化酶主要作用于-CH-NH2基团,在氧参与下,催化一种单胺氧化,生成相应的醛、氨和过氧化化氢。以苄醛偶氮-β-萘酚为底物,在O2和H2O参与下,MAO催化生成苄醛偶氮-β-萘酚(氨及过氧化化氢),用环己烷抽提后直接比色测定。
3.4 试剂
(1)0.1mol/L Tris缓冲液(pH7.2):称取Tris 12.1g,用蒸馏水溶解,加1mol/L盐酸85ml,调至pH7.2,以蒸馏水稀释到1L。
(2)0.5mmol/L苄胺偶氮-β-萘酚底物缓冲液:称取苄胺偶氮-β-萘酚13.8mg,加入约20ml Tris缓冲液,水浴加热并搅动,尽量溶解出色素部分,倒入100ml量瓶中,重复此操作,直至用Tris缓冲液溶解的色素部分达100ml,弃去黑色不溶物质,在冰箱保存可用3周。
(3)对苄醛偶氮-β-萘酚标准液(100nmol/ml):精密称取对苄醛偶氮-β-萘酚2.77mg,用无水乙醇溶解并稀释到100ml,冰箱保存可用数月。
(4)10%(W/V)过氯酸:取60%过氯酸8ml或70%过氯酸7ml,蒸馏水稀释至
50ml。
3.5 操作方法
按表1进行操作。
加塞振摇5min,置37℃水浴30min,其间用玻棒搅拌2次,取出离心沉淀10min,取上清液,在500nm波长处以空白调零比色。
3.6 正常值
12~40U/ml(12000~40000U/L)。
3.7 化验结果临床意义
血清中MAO和结缔组织中的MAO性质相似,能促进结缔组织的成熟,在胶原形成过程中,参与胶原成熟的最后阶段架桥形成,使胶原和弹性硬蛋白结合。临床上测定血清MAO主要用于诊断肝硬变。肝硬变时,血清MAO活性常明显增高,阳性率可高达80%以上。
3.8 附注
(1)对苄胺偶氮β-萘酚不易溶解,需在热水浴中逐步洗取其色素,直至只剩黑色不溶物质。
(2)对将苄醛化合物充分抽提到环己烷中,须置37℃水浴中30min,并搅拌2次。
(3)苄醛化合物环己烷抽提液的吸收峰为480nm,为减少血清中胆红素的干扰,用500nm波长。
(4)环己烷与水不互溶,比色前须用无水乙醇和乙醚洗比色杯,使其干燥后再比色。