5 丁型肝炎抗原的医学检查
5.1 检查名称
5.2 分类
5.3 化验取材
5.4 丁型肝炎抗原的测定原理
丁型肝炎病毒抗原外被乙型肝炎表明抗原(HBsAg)包裹,当用除污剂(Tween20或NP40)裂解后才被释放出来,利用抗原抗体特异性结合的免疫学原理,应用双抗体夹心酶联免疫吸附法进行检测。
5.5 试剂
(2)HRP-抗HDV抗体。
(3)具有中和活性的抗HBc单克隆抗体ELISA滴度1∶10万,用于稀释HRP-抗HD。
(4)10%Tween 20。
(5)其它器材和溶液均同上。
5.6 操作方法
(1)取包被液稀释抗-HDV IgG包被聚苯乙烯板,每孔100μl放37℃1h,4℃过夜。
(2)洗3次后,每孔分别加入待检血清和阴、阳性对照血清50μl(阴性对照血清孔,阳性对照血清2孔)和10%Tween20 50μl,充分混合均匀后放室温过夜,使之裂解丁肝病毒表面包裹的HBsAg释放丁肝抗原。
(3)洗3次后,每孔加入50μl HRP-抗HDV抗体(稀释液中除含10%小牛血清外还含有10个ELISA单位的抗HBc单克隆抗体),放45℃1h(或37℃2h)。
(4)洗3次后,每孔加50μl新鲜配制的底物液,放室温暗处显色15~30min后每孔加25μl 2mol/L H2SO4终止反应。
5.7 正常值
(1)目测法:棕色或黄色为HDAg阳性,无色为阴性。
(2)比色法:应用酶标仪测定波长492nm的光吸收值(A),根据样品的A值和阴性对照A平均值计算S/N值或阈值,凡样品S/N值≥2.1或大于阀值为阳性,反之为阴性。
阈值=阴性对照A492平均值×2.1。
5.8 化验结果临床意义
丁型肝炎病毒抗原,存在受感染的肝组织细胞内,外周血的完整病毒内,患者外周血中HDAG阳性表明体内有丁肝病毒复制,血中有丁型肝炎病毒。
5.9 附注
(1)由于丁型肝炎与乙型肝炎感染同时存在,外周血经除污剂处理后,可能HBAg与HBcAg同时存在,因此要注意注意防止HBcAg的干扰,故酶标记物中必须加入非标记的特异性中和HBcAg的单克隆抗体以排除之。