3 概述
胆碱酯酶(ChE)是肝合成而分泌入血的,它们和血浆白蛋白蛋白一样,是肝合成蛋白质功能的指标。人和动物的ChE有两类。一类是真胆碱酯酶(AChE),分布于红细胞及脑灰质等中。另一类是拟胆碱酯酶(PChE),分布于肝、脑白质及血清等中。ChE的主要功能为催化乙酰胆碱的水解。常用比色法与连续监测法测定。
5 胆碱酯酶的医学检查
5.1 检查名称
5.2 分类
5.3 化验取材
5.4 胆碱酯酶的测定原理
血清中ChE使乙酰胆碱水解成胆碱和乙酸,未被水解的剩余乙酰胆碱与羟胺作用生成乙酰羟胺,乙酰羟胺与铁离子在酸性溶液中形成棕色铁复合物,根据颜色深浅计算剩余乙酰胆碱含量,推算出水解乙酰胆碱的酶活力。
5.5 试剂
(1)磷酸盐缓冲液(pH8.0):将2/15mol/L磷酸氢二钠(Na2HPO4· 2H2O)23.752g溶于1000ml蒸馏水,2/15mol/L磷酸二氢钾(KH2PO418.150g溶于1000ml蒸馏水中),将上述两液按94.7∶5.3比例混合而成。
(2)0.001mol/L的醋酸钠溶液:称取醋酸钠(CH3-COONa·3H2O,AR)0.136g,
溶于蒸馏水使成为1000ml。
(3)0.008mol/L乙酰胆碱底物液:精确称取氯化乙酰胆碱0.1453g或溴化乙酰胆碱0.1809g,用0.001mol/L醋酸钠溶液溶解稀释至100ml。此液冰箱保存1周。
(6)碱性羟胺:将140g/L盐酸羟胺溶液与140g/L氢氧化钠溶液等量混合而成,按当天需要量配制。
(7)33.3%盐酸溶液(V/V):取浓盐酸一份加蒸馏水两份混合而成。
(8)0.6mol/L三氯化铁溶液:称取三氯化铁(FeCl3· 6H2O,AR)10g溶于0.1mol/
5.6 操作方法
按表1操作。
混匀后,离心沉淀,再加入三氯化铁溶液后10min,取上清液用520nm波长比色,以空白管调“0”,读取各管吸光度。
5.7 正常值
30~80U/ml。
5.8 化验结果临床意义
血清胆碱酯酶测定的临床意义在于酶活力降低。肝脏合成PChE,故肝实质细胞损害时降低。有机磷毒剂是AChE及PChE的强烈抑制剂,测定血清ChE与测定全血ChE一样,是协助有机磷中毒诊断及预后估计的重要手段。
5.9 附注
(1)此法显色不稳定,特别是室温超过20℃时影响明显,加三氯化铁显色,应迅速过滤或离心沉淀取上清液比色,否则误差较大,室温过高时,最好于冰水浴操作和过滤。
(2)某些患者滤液混浊不清,比色困难,此类现象见于肝脓肿,败血症,可能是由于此类患者血清粘蛋白含量往往很高,三氯醋酸未能使蛋白完全沉淀,在有些方法中加磷酸可克服此缺点。