3 概述
β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶（NAG）可水解β-N-乙酰氨基葡萄糖苷，也能水解β-N-乙酰氨基半乳糖苷。该酶广泛存在于各种组织器官、体液、血细胞中，是溶酶体中的一种酸性水解酶。其测定方法有比色法和荧光光度法。
4 β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶的医学检查
4.1 检查名称
4.2 分类
4.3 β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶的测定原理
（1）对硝基酚比色法：NAG可使底物对硝基酚-N-乙酰-β-D氨基葡萄糖水解，释放出游离的对硝基酚，在碱性溶液中显色，其颜色深浅与酶活力有关。
（2）荧光光度法：NAG可使荧光底物4-甲基伞形酮N-乙酰β-D-氨基葡萄糖苷水解，释放出游离的4-甲基伞形酮（4-MU），后者在碱性条件下变构，受激发产生荧光，其荧光强度可反
4.4 试剂
①50mmol/L枸橼酸盐缓冲液（pH4.6）：称枸橼酸（C6H3O7·H2O）5.4g，枸橼酸三钠（Na3C6H5O7·2H2O）10g，用蒸馏水溶解后稀释至1000ml。
②10mmol/L底物缓冲液：称对硝基苯N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷342.3mg，用上述缓冲液稀释至100ml，混匀，4℃冰箱可保存10天。
③50mmol/L硼砂-氢氧化钠缓冲液（pH9.8）：称硼砂（Na2B407·H2O）4.77g，用蒸馏水溶解，加0.2mmol/L NaOH 170ml，再用蒸馏水稀释至1000ml。
④3mmol/L对硝基酚标准液：取纯化的对硝基酚41.7mg，用蒸馏水溶解并稀释至100ml，混匀后置冰箱保存。
（2）荧光光度法：
①枸橼酸-磷酸盐缓冲液（pH4.5）：12.6g/L枸橼酸· H2O（60mmol/L）和13.5g/L无水碳酸氢钠（95mmol/L）各50ml，混合测pH应为4.5。取已配好的上述缓冲液（枸橼酸30mmol/L，磷酸盐47.5mmol/L）50ml，加叠氮钠10mg，牛血清白蛋白50mg，溶解，4℃冰箱可稳定数周，混浊应弃去，此为含牛血清白蛋白的缓冲液。
②2mmol/L底物缓冲液：称4-甲基伞形酮-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷（MW：
379.4）7.6mg，溶入10ml含牛血清白蛋白缓冲液中，分装于具塞试管内，－20℃可保存数月，忌反复冻融。
③酶反应终止液（pH10.4）：称甘氨酸37.5g，溶于1000ml蒸馏水中，加入920ml 0.5mol/L NaOH，用0.5mol/L NaOH调pH至10.4。
④300μmol/L 4-MU标准液：称4-MU 11mg，用终止液溶解并稀释至250ml，此为贮存液。置棕色瓶4℃保存，至多稳定10天。
4.5 操作方法
混合，在405nm波长，1cm光径，蒸馏水调零，读取各管吸光度，用（AU-AC）之差查标准曲线。
①基质对硝基酚应纯化，配制前置50℃烘24h。用10mmol/L NaOH配成0.04mmol/L浓度，用窄带宽分光光度计扫描吸收曲线，λmax＝401nm，根据IFCC标准，Aλmax＝0.7316～0.7388，Eλmax＝18380±90（25℃）。根据对硝基酚的摩尔吸光系数，计算NAG活性单位的公式为：
以上公式是根据IFCC的标准E值计算的，各实验室应根据具体仪器条件测定E值，建立计算式。
②底物溶解度小，配制时应先用适量pH 4.6缓冲液调成糊状，再逐渐加缓冲液至所需量。
③测定结果超线性范围时，应将标本用生理盐水稀释后重测，结果乘以稀释倍数。
④尿酶浓度受尿量影响较大，应留取24h尿量。若以NAG/g肌酐比值计算酶排出率，即不受尿浓缩或稀释的影响，又不需留24h尿。
（2）荧光光度法：先将血清或尿用不含牛血清白蛋白（BSA）的缓冲液作20倍稀释，按表2操作。
混匀，激发波长364nm，发射波长448nm，以终止液调零，6μmol/L 4-MU管调荧光强度至100后，分别测空白管及测定管的荧光强度。
②也可用上海第三分析仪器厂产930荧光光度计，激发滤光片360，发射滤光片用（400＋450）复合，效果满意。
③本法酶反应液中各成分浓度为：底物1.33mmol/L，枸橼酸20mmol/L，Na2HPO432mmol/L。
④配试剂所用溶剂应用重蒸馏水，底物应无游离4-MU，BSA中应无该酶或用50℃加热2h灭活。
⑤血清中NAG于4℃稳定数小时至数天，－20℃可稳定数月。尿标本4℃稳定1周，也可用枸橼酸盐抗凝血浆。
⑥β-N-乙酰氨基葡萄糖苷可被二种酶催化水解，一种是β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶（EC 3.2.1.30），另一种是β-N-乙酰已糖苷酶（EC 3.2.1.52），只有对提纯的酶才能限定EC 3.2.1.30或EC 3.2.1.52。目前国内文献中常称的NAG，严格地说是按所用底物命名的，而不是指酶对底物的特异性。所以目前国外文献常泛称β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶。
4.6 正常值
（1）对硝基酚比色法：血清NAG：21.54±6.4U/L，尿液NAG呈正态分布，中位数为9.13U/g肌酐，第95百分位数上限为16.10U/g肌酐。
（2）荧光光度法：
成人血清9.94±2.O7U/L。
成人尿液6.39±3.19U/L Cre。
4.7 化验结果临床意义
血、尿NAG活性测定对反映肾实质病变，尤其是急性损伤和活动期病变更
（1）肾小管疾病：重金属（汞、铅、镉等）及药物性肾损伤、缺血、缺氧、失血、休克等均可引起NAG活性增加。
（2）肾病综合征：尿NAG常明显增加，缓解期下降，复发时迅速回升，故可作为临床观察指征。肾小球肾炎急性期变化较大，但与肾小管损伤相比，变化幅度较小。
（3）尿路感染的定位诊断：急、慢性肾盂肾炎尿NAG上升，能与单纯性膀胱炎区别。可用于早期上尿路感染的诊断。
（4）肾移植排斥反应的监测：肾移植排斥反应早期NAG即可升高，比尿蛋白、血肌酐、肌酐清除率更敏感。
（5）糖尿病肾痛早期诊断：糖尿病肾肾病尿NAG升高，用于本病的早期诊断优于尿白蛋白及β2-微球蛋白。
4.8 附注
①基质对硝基酚应纯化，配制前置50℃烘24h。用10mmol/L NaOH配成0.04mmol/L浓度，用窄带宽分光光度计扫描吸收曲线，λmax＝401nm，根据IFCC标准，Aλmax＝0.7316～0.7388，Eλmax＝18380±90（25℃）。根据对硝基酚的摩尔吸光系数，计算NAG活性单位的公式为：
以上公式是根据IFCC的标准E值计算的，各实验室应根据具体仪器条件测定E值，建立计算式。
②底物溶解度小，配制时应先用适量pH 4.6缓冲液调成糊状，再逐渐加缓冲液至所需量。
③测定结果超线性范围时，应将标本用生理盐水稀释后重测，结果乘以稀释倍数。
④尿酶浓度受尿量影响较大，应留取24h尿量。若以NAG/g肌酐比值计算酶排出率，即不受尿浓缩或稀释的影响，又不需留24h尿。
（2）荧光光度法：
②也可用上海第三分析仪器厂产930荧光光度计，激发滤光片360，发射滤光片用（400＋450）复合，效果满意。
③本法酶反应液中各成分浓度为：底物1.33mmol/L，枸橼酸20mmol/L，Na2HPO432mmol/L。
④配试剂所用溶剂应用重蒸馏水，底物应无游离4-MU，BSA中应无该酶或用50℃加热2h灭活。
⑤血清中NAG于4℃稳定数小时至数天，－20℃可稳定数月。尿标本4℃稳定1周，也可用枸橼酸盐抗凝血浆。
⑥β-N-乙酰氨基葡萄糖苷可被二种酶催化水解，一种是β-N-乙酰氨基葡萄糖苷苷酶（EC 3.2.1.30），另一种是β-N-乙酰已糖苷酶（EC 3.2.1.52），只有对提纯的酶才能限定EC 3.2.1.30或EC 3.2.1.52。目前国内文献中常称的NAG，严格地说是按所用底物命名的，而不是指酶对底物的特异性。所以目前国外文献常泛称β-N-乙酰氨基葡萄糖苷苷酶。